ʻO kekahi o nā pōmaikaʻi nui o ka moʻomeheu cell ka hiki ke hoʻoponopono i ka kemika kino o ka hana hou ʻana o ke kelepona (ʻo ia hoʻi ka mahana, ka pH, ke kaomi osmotic, O2 a me ka CO2 tension) a me ke kaiapuni physiological (ʻo ia hoʻi ka hormone a me ka ʻai meaʻai).Ma waho aʻe o ka mahana, hoʻomaluʻia ka nohona moʻomeheu e ka ulu ulu.
ʻOiai ʻaʻole maopopo ke ʻano physiological o ka moʻomeheu e like me kona kaiapuni kino a me ke kemika, ʻoi aku ka maikaʻi o ka hoʻomaopopo ʻana i nā ʻāpana serum, ka ʻike ʻana i nā mea ulu e pono ai no ka hoʻonui ʻana, a me ka ʻike maikaʻi ʻana i ka microenvironment o nā cell i ka moʻomeheu.(ʻO ia hoʻi ka pilina pūnaewele, ka hoʻoheheʻe kinoea, ka launa pū ʻana me ka matrix) i kēia manawa e ʻae i kekahi mau laina kelepona e hoʻomaʻamaʻa ʻia i ka media serum-free.
1.Culture kaiapuni pili i ka ulu cell
E ʻoluʻolu, ʻokoʻa nā kūlana moʻomeheu cell no kēlā me kēia ʻano kelepona.
ʻO nā hopena o ka haʻalele ʻana mai nā kūlana moʻomeheu i koi ʻia no kahi ʻano cell mai ka hōʻike ʻana o nā phenotypes ʻano ʻē a hiki i ka pau ʻole o ka moʻomeheu cell.No laila, manaʻo mākou e kamaʻāina ʻoe i ka laina kelepona āu e makemake ai a hahai pono i nā kuhikuhi i hāʻawi ʻia no kēlā me kēia huahana āu e hoʻohana ai i kāu hoʻokolohua.
2.Precautions no ka hana ʻana i kahi moʻomeheu cell optimized no kāu mau cell:
ʻO ka media moʻomeheu a me ka serum (e ʻike i lalo no ka ʻike hou aku)
Nā pae pH a me CO2 (e ʻike i lalo no ka ʻike hou aku)
E hoʻoulu i ka plastic (e ʻike i lalo no ka ʻike hou aku)
Ka wela (e nānā i lalo no ka ʻike hou aku)
2.1 Moʻomeheu Media a me Serum
ʻO ka moʻomeheu ka mea nui loa o ka moʻomeheu moʻomeheu, no ka mea, hāʻawi ia i nā meaʻai, nā mea ulu a me nā hormones e pono ai no ka ulu ʻana o ke kelepona, a hoʻoponopono i ka pH a me ka osmotic pressure o ka moʻomeheu.
ʻOiai ua hana ʻia nā hoʻokolohua moʻomeheu cell mua me ka hoʻohana ʻana i ka media kūlohelohe i loaʻa mai nā ʻāpana kiko a me nā wai o ke kino, ʻo ka pono o ka standardization, ka maikaʻi o ka media, a me ka hoʻonui ʻana i ka noi i alakaʻi ʻia i ka hoʻomohala ʻana o ka media definitive.ʻO nā ʻano kumu ʻekolu o ka media he basal media, hoʻemi ʻia ka serum media a me ka serum-free media, a loaʻa iā lākou nā koi like ʻole no ka serum supplementation.
2.1.1 Kumu kumu
ʻano moʻomeheu cell Gibco
Ke ulu maikaʻi nei ka hapa nui o nā laina kelepona i loko o nā pāpaho kumu i loaʻa nā amino acids, nā huaora, nā paʻakai inorganic, a me nā kumu kalapona (e like me ka glucose), akā pono e hoʻohui ʻia kēia mau mea hoʻopuka media kumu me ka serum.
2.1.2 Hoʻemi ʻia ka liʻiliʻi serum
ʻO ka ʻōmole me Gibco Low Serum Medium
ʻO kahi hoʻolālā ʻē aʻe e hōʻemi i nā hopena maikaʻi ʻole o ka serum i loko o nā hoʻokolohua moʻomeheu cell e hoʻohana i ka media i hoʻemi ʻia i ka serum.ʻO ka liʻiliʻi liʻiliʻi liʻiliʻi he ʻano kumu maʻamau i waiwai i nā meaʻai a me nā mea i loaʻa i nā holoholona, hiki ke hōʻemi i ka nui o ka serum e pono ai.
2.1.3 ʻAiʻa Serum-ʻole
ʻO ka ʻōmole me Gibco serum-free medium
Hoʻopili ʻo Serum-free medium (SFM) i ka hoʻohana ʻana i ka serum holoholona ma o ka hoʻololi ʻana i ka serum me ka meaʻai kūpono a me ka hoʻokumu ʻana i ka hormone.Nui nā moʻomeheu mua a me nā laina kelepona i loaʻa i ka serum-free medium formulations, me ka Chinese Hamster Ovary (CHO) recombinant protein production line, nā laina laina hybridoma cell, nā laina insect Sf9 a me Sf21 (Spodoptera frugiperda), a me ka mea hoʻokipa no ka hana maʻi virus. (no ka laʻana, 293, VERO, MDCK, MDBK), a me nā mea ʻē aʻe. ʻO kekahi o nā pōmaikaʻi nui o ka hoʻohana ʻana i ka serum-free medium ʻo ia ka hiki ke koho i ka waena no nā ʻano cell kikoʻī ma ke koho ʻana i kahi hui kūpono o nā kumu ulu.Hōʻike ka papa ma lalo nei i nā pono a me nā hemahema o ka media serum-free.
Pōmaikaʻi
E hoʻonui i ka mālamalama
ʻOi aku ka hana kūlike
ʻOi aku ka maʻalahi o ka hoʻomaʻemaʻe a me ka hana ʻana i lalo
E nānā pono i ka hana o ke kelepona
Hoʻonui i ka huahana
ʻOi aku ka maikaʻi o ka mālama ʻana i nā hopena physiological
Ua hoʻonui ʻia ka ʻike ʻana i ka ʻike kelepona
Ka pōʻino
Nā koi ʻano kikoʻī kiko waena o ke kelepona
Pono ka maʻemaʻe reagent kiʻekiʻe
Hoʻolohi i ka ulu
2.2.1 pH pae
ʻO ka hapa nui o nā laina kelepona maʻamau e ulu maikaʻi ma ka pH 7.4, a liʻiliʻi nā ʻokoʻa ma waena o nā laina kelepona ʻokoʻa.Eia naʻe, ua hōʻike ʻia kekahi mau laina kelepona i hoʻololi ʻia e ulu maikaʻi aʻe i loko o kahi kaiapuni liʻiliʻi (pH 7.0 – 7.4), ʻoiai makemake kekahi mau laina cell fibroblast maʻamau i kahi wahi alkaline iki (pH 7.4 – 7.7).Ke ulu maikaʻi nei nā laina kelepona e like me Sf9 a me Sf21 ma ka pH 6.2.
2.2.2 pae CO2
Mālama ka mea ulu i ka pH o ka moʻomeheu a pale i nā cell i ka moʻomeheu e pale aku i nā loli i ka pH.ʻO ka maʻamau, loaʻa kēia hoʻopaʻa ʻana ma o ka loaʻa ʻana o nā mea kūlohelohe (no ka laʻana, HEPES) a i ʻole CO2-bicarbonate-based buffers.No ka mea, pili ka pH o ka mea waena i ke koena palupalu o ka carbon dioxide (CO2) a me ka bicarbonate (HCO3-), e hoʻololi nā hoʻololi i ka CO2 lewa i ka pH o ka medium.No laila, i ka wā e hoʻohana ai i kahi mea i hoʻopaʻa ʻia me kahi buffer CO2-bicarbonate-based, pono e hoʻohana i ka exogenous CO2, ʻoi aku ka nui o ka hoʻoulu ʻana i nā cell i nā kīʻaha moʻomeheu ākea a i ʻole ke kanu ʻana i nā laina kelepona i hoʻololi ʻia i nā kiʻekiʻe kiʻekiʻe.ʻOiai ʻo ka hapa nui o nā mea noiʻi e hoʻohana maʻamau i ka 5-7% CO2 i ka lewa, ʻo ka hapa nui o nā hoʻokolohua moʻomeheu cell e hoʻohana maʻamau i ka 4-10% CO2.Eia nō naʻe, loaʻa i kēlā me kēia meʻa kahi manaʻo CO2 i manaʻo ʻia a me ka manaʻo bicarbonate no ka loaʻa ʻana o ka pH kūpono a me ke kaomi osmotic;no ka ʻike hou aku, e ʻoluʻolu e nānā i nā ʻōlelo kuhikuhi a ka mea hana.
2.3 Ka mahi ʻana i nā palaka
Loaʻa nā plastic moʻomeheu cell ma nā ʻano like ʻole, ka nui a me nā ʻili e kūpono i nā noi moʻomeheu cell.E hoʻohana i ke alakaʻi moʻomeheu moʻomeheu kiʻekiʻe a me ke alakaʻi ipu moʻomeheu cell ma lalo nei e kōkua iā ʻoe e koho i ka plastic pono no kāu noi moʻomeheu cell.
E nānā i nā plastic moʻomeheu cell Thermo Scientific Nunc (loulou hoʻolaha)
2.4 Mahana
ʻO ka mahana maikaʻi loa no ka moʻomeheu cell e hilinaʻi nui ʻia i ka wela o ke kino o ka mea hoʻokipa kahi i hoʻokaʻawale ʻia ai nā cell, a i ka liʻiliʻi liʻiliʻi i nā loli anatomical i ka mahana (e like paha, ʻoi aku ka haʻahaʻa o ka ʻili ma mua o ka ʻiʻo iwi. ).No ka moʻomeheu kelepona, ʻoi aku ka pilikia o ka overheating ma mua o ka wela.No laila, hoʻonohonoho maʻamau ka mahana o ka incubator ma lalo o ka mahana kūpono.
2.4.1 ʻO ka wela kūpono no nā laina kelepona like ʻole
Mālama ʻia ka hapa nui o nā laina kelepona kanaka a me ka mammalian ma 36°C a 37°C no ka ulu maikaʻi loa.
Hoʻouluʻia nā pūnaewele'okena ma 27 ° C no ka ulu maikaʻi loa;ulu mālie lākou ma nā mahana haʻahaʻa a me nā mahana ma waena o 27 ° C a me 30 ° C.Ma luna o 30 ° C, e emi ana ka ikaika o nā pūnana pepeke, ʻoiai inā e hoʻi i ka 27 ° C, ʻaʻole e hoʻihoʻi nā cell.
Pono nā laina kelepona Avian i 38.5°C e hiki i ka ulu kiʻekiʻe.ʻOiai hiki ke mālama ʻia kēia mau cell ma 37 ° C, e ulu mālie lākou.
Hiki i nā laina kelepona i loaʻa mai nā holoholona koko anu (e like me nā amphibians, nā iʻa wai anuanu) hiki ke ʻae i kahi ākea ākea o 15°C a 26°C.
Ka manawa hoʻouna: Feb-01-2023